本发明涉及一种柴胡舒肝丸中有效成分的检测方法，特别涉及一种气相色谱法检测药丸中柴胡皂苷的检测方法。
背景技术：
中医认为气是维持人体生命活动的最基本能量，气在体内的畅通运行保证各个器官的正常功能。俗话说，怒伤肝，情志不遂引起气在肝经运行受阻，不得疏泄，导致血滞，出现胁肋疼痛，但x光检查看不出任何异常。人有肝气郁结时，还常唉声叹气，心事重重，容易生气，腹胀，暖气，泛酸，脉弦等。
柴胡舒肝丸，中医方剂名。出自《中国药典》。具有舒肝理气，消胀止痛之功效。主治肝气不舒，胸胁痞闷，食滞不消，呕吐酸水。临床常用于痞证，呕吐，胁痛。方中以柴胡、枳壳、香附舒肝解郁，理气止痛，为主药。紫苏梗、桔梗散上焦之郁，青皮、陈皮理中焦之气，木香、乌药行下焦气滞，配合白芍、当归养血柔肝，补肝体而助肝用，共为辅药。三棱、莪术活血通络，散郁破结以化血郁；豆蔻、厚朴燥湿除满，行气化浊以散湿郁；山楂、六神曲、槟榔消食导滞，破积除胀以消食郁；茯苓、半夏健脾化痰以祛痰郁；黄芩、薄荷疏肝清热，大黄(酒炒)清热泻火以治火郁；防风搜风理气疏肝，为佐药；甘草调和诸药，为使。诸药相合，共奏疏肝理气、消胀止痛之功。90克制成大蜜丸，即得。
柴胡药材来源于伞形科植物柴胡bupleurumchinensedc.或狭叶柴胡bupleurumscorzonerifoliumwilld的干燥根。为常用中药,在我国已有2000多年药用历史，具有和解表里、疏肝、升阳之功效。其主要有效成分为柴胡皂苷,其中柴胡皂苷a,d的活性较强,具有抗炎、保肝、降低血中胆固醇等药理活性。
在2015年版中国药典中，柴胡舒肝丸含量测定的指标只涉及黄芩苷、厚朴酚，不涉及柴胡皂苷。现有技术中，也没有检测柴胡舒肝丸中柴胡皂苷的文献报道。另外，现有技术对柴胡皂苷的检测，基本都是采用高效液相色谱法，所调整的也仅是流动相、检测器，并没有采用气相色谱法对柴胡皂苷检测的报道。
技术实现要素：
本发明目的在于提供一种气相色谱法检测药丸中柴胡皂苷的检测方法，测定方法简单、准确而且灵敏度高。
为了对柴胡舒肝丸进行有效的质量控制，并对常规检测方法进行扩展，本发明提供了一种气相色谱法检测柴胡舒肝丸中柴胡皂苷的方法。
本发明的目的是这样实现的：一种气相色谱法检测药丸中柴胡皂苷的检测方法，测定步骤如下：
(1)提取
取本品粉末，过筛，精密称取，置锥形瓶内，精密加入适量乙醚，称定重量，水浴加热回流，立即冷却，加乙醚补足失重，密封放置，过滤，残渣加乙醚洗涤，合并乙醚液蒸干，残渣加甲醇溶解，过滤，定容，得待测液。
(2)色谱分析
hp-innowax(柱长30m，内径0.32mm，液膜厚度0.5μm)；升温程序：初始温度80℃，然后以20℃每分钟的速率升温至180℃，保持1min，再以10℃每分钟的速率升温至240℃；fid检测。
进一步的，所述提取步骤还包括：过60目筛，精密称取样品2g，加入80ml乙醚。
进一步的，所述提取步骤还包括：水浴加热回流30min，密封放置过夜。
进一步的，所述提取步骤还包括：洗涤步骤采用10ml乙醚洗涤，两次。
进一步的，色谱条件还包括：进样口温度：250℃；载气：高纯氦气；载气流速：1.0ml/min；不分流进样；进样量：1μl；检测器温度为230℃。
进一步的，所述柴胡皂苷为柴胡皂苷a、d。
进一步的，采用标准曲线法定量。其中，标准样品溶液的制备的步骤如下：取柴胡皂苷a、d标准品，用甲醇溶液溶解，制成标准品储备液；用甲醇溶液逐级将制备好的标准品储备液稀释得到所述标准品系列浓度溶液。
进一步的，系列浓度为0.1mg/ml、0.05mg/ml、0.01mg/ml、0.005mg/ml、0.001mg/ml。
进一步的，绘制标准曲线，将各化合物面积与对应质量浓度做线性回归，根据得到的线性回归方程计算待测样品中各化合物的含量。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明在样品前处理时采用乙醚直接加热回流提取，操作简单方便，可以有效地提取柴胡舒肝丸中的柴胡皂苷a、d；
(2)本发明中色谱条件能同时对柴胡皂苷a、d进行有效分离，分析时间短，效率高；
(3)采用本发明所述的方法进行检测，回收率在88.7～105.3％之间，rsd为2.58～3.24％，检测结果准确；
附图说明
图1为柴胡皂苷a、d标准溶液的色谱图，柴胡皂苷a的保留时间为2.80min，柴胡皂苷d的保留时间为6.03min。
具体实施方式
下面结合附图对本发明作进一步说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换，均落入本发明保护范围。
实施例1
采用本发明所述方法检测柴胡舒肝丸中柴胡皂苷的含量
仪器：17a气相色谱仪，配有火焰离子化检测器(fid)，ab265-a型分析天平，hp-innowax气相色谱柱(柱长30m，内径0.32mm，液膜厚度0.5μm)。
标准品：柴胡皂苷a、d(纯度均>98.0％)；乙醚、甲醇(色谱纯)。
制备标准品储备液溶液：分别准确称取柴胡皂苷a、d标准品，置于同一个10ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成标准品储备液，移取相应储备液逐级稀释得到相应的标准品系列溶液。系列浓度为0.1mg/ml、0.05mg/ml、0.01mg/ml、0.005mg/ml、0.001mg/ml。
前处理过程：取本品粉末，过60目筛，精密称取2g，置锥形瓶内，精密加入80ml乙醚，称定重量，水浴加热回流30min，立即冷却，加乙醚补足失重，密封放置过夜，过滤，残渣加乙醚洗涤(10ml×2)，合并乙醚液蒸干，残渣加甲醇溶解，过滤，定容，得待测液。
取1μl上述提取液注入气相色谱仪检测，测定色谱图；
气相色谱条件如下：
hp-innowax(柱长30m，内径0.32mm，液膜厚度0.5μm)；升温程序：初始温度80℃，然后以20℃每分钟的速率升温至180℃，保持1min，再以10℃每分钟的速率升温至240℃；fid检测；进样口温度：250℃；载气：高纯氦气；载气流速：1.0ml/min；不分流进样；进样量：1μl；检测器温度为230℃。
标准品的色谱图如图1所示。
实施例2
工作曲线、检出限和定量限
对标准品系列溶液进行分析，以柴胡皂苷a、d的色谱峰面积对其质量浓度进行线性回归，分别得到工作曲线回归方程和相关系数(表1)。在浓度范围0.001～0.1mg/ml范围内，柴胡皂苷a、d线性关系良好。
表1各化合物的标准曲线
实施例3
回收率和精密度
取不含柴胡的柴胡舒肝丸阴性样品，分别加入高、中、低不同浓度水平的柴胡皂苷a、d标准溶液。按照实施例1的色谱条件重复测定6次，计算平均回收率和rsd，回收率在88.7～105.3％之间，rsd为2.58～3.24％，说明本方法回收率好。
综上，本发明提供的气相色谱法检测药丸中柴胡皂苷的检测方法，样品前处理简便、高效，能有效提取出柴胡舒肝丸中的柴胡皂苷a、d，从而为柴胡舒肝丸提供有效的质量控制保障。
以上所述仅为本发明的优选实施例，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的相关技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，其中所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
